流式细胞仪原理是什么？流式细胞仪怎么操作？

流式细胞仪原理是什么?

流式细胞仪可同时进行多参数测量，信息主要来自特异性荧光信号及非荧光散射信号。测量是在测量区进行的，所谓测量区就是照射激光束和喷出喷孔的液流束垂直相交点。液流中央的单个细胞通过测量区时，受到激光照射会向立体角为2π的整个空间散射光线，散射光的波长和入射光的波长相同。散射光的强度及其空间分布与细胞的大小、形态、质膜和细胞内部结构密切相关，因为这些生物学参数又和细胞对光线的反射、折射等光学特性有关。未遭受任何损坏的细胞对光线都具有特征性的散射，因此可利用不同的散射光信号对不经染色活细胞进行分析和分选。经过固定的和染色处理的细胞由于光学性质的改变，其散射光信号当然不同于活细胞。散射光不仅与作为散射中心的细胞的参数相关，还跟散射角、及收集散射光线的立体角等非生物因素有关。

流式细胞仪怎么操作?

①打开电源，对系统进行预热;

②打开气体阈，调节　压力，获得适宜的液流速度;开启光源冷却系统;

③在样品管中加入去离子水，冲洗液流的喷嘴系统;

④利用校准标准样品，调整仪器，使在激光功率、光电倍增管电压、放大器电路增益调定的基础上，0和90散射的荧光强度最强，并要求变异系数为最小;

⑤选定流速、测量细胞数、测量参数等，在同样的工作条件下测量样品和对照样品;同时选择计算机屏上数据的显示方式，从而能直观掌握测量进程;

⑥样品测量完毕后，再用去离子水冲洗液流系统;

⑦因为实验数据已存入计算机硬盘(有的机器还备有光盘系统，存贮量更大)，因此可关闭气体、测量装置，而单独使用计算机进行数据处理;

⑧将所需结果打印出来。